今天收到一位网友的邮件，问有关胰岛分离培养的问题，问题如下：

1. 根据您博客中的描述，您所用的方法应该是外消化，根据丁香园的讨论帖，这种消化很难得到胰岛啊?是因为事先用hanks液将胰腺充盈了就好消化么？

2. 根据丁香园的描述，胶原酶消化，ficoll密度梯度离心后应该达到了分离和纯化的目的，因此不需要镜下手工挑取。但是我实验中发现做不到。在目的层面除了胰岛还有不少外分泌腺细胞。这是因为我消化过度还是消化不足呢？如果做GSIS，是不是一定要手工挑一下呢？

3. 我分离胰岛后培养过夜就进行实验，您博客中描述培养3天，这差别大么？

4. 分离胰岛能否长期培养？我分离的胰岛在1640培养基3天就有死亡的，我曾经试过培养一周，多数分离胰岛都萎缩死亡，少数贴壁的胰岛感觉包膜的成纤维细胞生长起来了，胰岛内部细胞却不能生长。是不是培养条件有问题？要不要20%血清呢。另外您说1640培养基，10mM葡萄糖，是再加入浓度10mM葡萄糖么（1640 本身葡萄糖浓度好像200mg/dl）？

5. 不知现在胰岛分离有无更好的方法或试剂？

早晨匆匆回答了一下，现在润色后回答如下： 继续阅读 »

最近到一个医学论坛“丁香园”看了看，在内分泌专栏下，看到一个很火的关于胰岛分离培养与功能测试的帖子，很高兴看到国内开始越来越多地关注胰岛研究。我在胰岛领域已经工作近10年了，每天的工作就是胰岛，从分离培养开始，到做各种各样的实验，我每年大约要分离出10到25万个胰岛，所以很想谈谈自己的感受。

最早的胰岛分离技术见于1967年糖尿病杂志发表的Paul Lacy的文章，描述了如何从大鼠胰腺分离完整胰岛的技术，到现在半个世纪过去了，基本技术还是当年的。总的原理就是把胶原酶注射到老鼠胆管里，但要阻断胆管流入小肠胆胰壶腹（Ampulla of Vater）的通道，所以胶原酶就反流到胰腺导管里，胰外分泌腺被胶原酶消化破坏，胰岛就分离出来了。

我自己用的方法与Lacy的方法尽管原理类似，但还是有很大的不同。我是把Hanks缓冲液注射到胆管里，象吹气球一样用Buffer把胰腺吹起来，大鼠，小鼠都是这样，然后把胰腺剥离下来，放到一边等待消化，这样可以很从容地一只接一只地做，我最多的时候可以一次做10只小老鼠，三只大老鼠。这样做的好处就是可以大规模的分离胰岛，上午10只小鼠，下午10只，每天最多可以分离到5000到10000个小鼠胰岛。 继续阅读 »